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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人腦膜分離自腦膜組織；腦膜是顱骨與腦間的隔膜，一共有三層，由外向內為硬腦膜、蛛網膜和軟腦膜。腦膜細胞圍繞著大腦，參與中樞神經系統(tǒng)的正常發(fā)育，能穩(wěn)定腦軟膜表面的細胞外基質、組織放射狀膠質細胞網絡和小腦皮層分層結構。

方法簡介：

公司實驗室分離的人腦膜采用消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人腦膜經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

小鼠 IgG(mouse IgG)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 ADI

小鼠類胰島素樣生長因子 -1 (mouse IGF-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

小鼠 IGF-II (Mouse IGF-II) ELISA Kit   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

小鼠白介素 -1 a (mouse IL-1 a )   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   奧地利 Bender

小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 人水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒

Humanalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanApolipoproteinC3,ApoC3試劑盒人載脂蛋白C3(ApoC3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氧化應激活性氧(ROS)熒光測定試劑盒(過氧亞硝基陰離子)20次

Humaoll-likereceptor9,TLR-9ELISAKit人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CXADR重組小鼠 CXADR 蛋白 Protein

Adipo R2(adiponectin receptor 2 0.5mgAdipo R2(adiponectin receptor 2) 脂聯素受體-2(抗原)

AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

FCGR2B Protein Human 重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated

IL13RA1 Protein Rat 重組大鼠 IL13RA1 蛋白 (Fc 標簽)

Adipo R2(adiponectin receptor 2 0.5mgAdipo R2(adiponectin receptor 2) 脂聯素受體-2(抗原)

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人腦膜細胞大鼠細胞因子信號轉導抑制因子1(SOCS1)試劑盒 ，英文名： SOCS1 ELISA Kit

Mouse glial fibrillary acidic protein (GFAP) ELISA Kit 小鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒

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HSV-IIgM單皰疹Ⅰ型病毒IgM(捕獲法二步法)

細胞IRAK4激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-4大鼠白介素4