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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞

英文名稱：Mouse Small Intestine Vascular Endothelial Cells

組織來源：小腸組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠小腸血管內(nèi)皮分離自小腸組織；小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場(chǎng)所。小腸盤曲于腹腔內(nèi)，上連胃幽門，下接盲腸，分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的，因?yàn)槭澄锝?jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動(dòng)的機(jī)械性消化后，基本上完成了消化過程，同時(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運(yùn)動(dòng)功能，其中以吸收和分泌功能為主。平滑肌細(xì)胞的收縮是負(fù)責(zé)腸蠕動(dòng)的動(dòng)力，促使食物向下運(yùn)動(dòng)。血管內(nèi)皮細(xì)胞除了吞噬異物、細(xì)菌、壞死和衰老的組織等，還參與集體免疫活動(dòng)，包括：①血管收縮及血管舒張，從而控制血壓；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）；③動(dòng)脈硬化；④血管生成；⑤炎癥及腫脹（浮腫）；⑥內(nèi)皮細(xì)胞亦控制一些物質(zhì)，如白血球進(jìn)出血管。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠小腸血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠小腸血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGFC)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： VEGFC ELISA Kit

Mouse noradrenaline (NA) ELISA Kit 小鼠去甲(NA)檢測(cè)試劑盒

Mousemonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP-1/MCAFELISAkit 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanbactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPIELISAKit人殺菌性/通透性增加蛋白

細(xì)胞EPHA1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPP大鼠蛋酸酶

LEPR重組人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

糖原合酶激酶3α(GSK3α)重組蛋白 Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)

CNPY3重組人 CNPY3 / PRAT4A / ERDA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 / Delta4 蛋白

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

糖原合酶激酶3α(GSK3α)重組蛋白 Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)

DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 / Delta4 蛋白

LEPR重組人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CNPY3重組人 CNPY3 / PRAT4A / ERDA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai alpha fodrin aibody IgG/IgA (-Fodrin IgG/IgA) ELISA Kit 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)檢測(cè)試劑盒

Humanglycosylatedserumprotein,GSPELISAKit 人糖化蛋白(GSP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAlpha-fetoprotein,AFP檢測(cè)試劑盒人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物半胱(cysteine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

Monkeyβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞小鼠紅細(xì)胞生成素受體(mouse EPOR)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(mouse ECP)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽-78(mouse ENA-78)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠血管內(nèi)皮抑素(mouse Endostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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