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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔胰腺上皮細(xì)胞

英文名稱：Rabbit Pancreatic Epithelial Cells

組織來(lái)源：胰腺

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

兔胰腺上皮分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、。胰液通過(guò)胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖；γ細(xì)胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、胰液分泌和膽囊收縮。胰腺干細(xì)胞在發(fā)育上被認(rèn)為分離自內(nèi)胚層胰腺上皮，在隨后的胰腺發(fā)育過(guò)程中，胰腺干細(xì)胞分化為胰島細(xì)胞（α、β、δ、PP細(xì)胞）、導(dǎo)管上皮細(xì)胞以及腺泡細(xì)胞。胰腺組織中還存在大量的間充質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞，包括成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞以及星形細(xì)胞，其中以成纖維細(xì)胞占主要部分。要離體分離培養(yǎng)獲得胰腺上皮細(xì)胞就要排除間充質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞，尤其是成纖維細(xì)胞。目前常用的去除成纖維細(xì)胞方法有機(jī)械刮除法、消化以及膠原酶消化法等，胰腺上皮細(xì)胞的病變與急慢性胰腺炎的發(fā)生具有重大意義。

實(shí)驗(yàn)室分離的兔胰腺上皮采用膠原酶分次消化法并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔胰腺上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔胰腺上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠肌酸激酶MB同工酶(CKMB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： CKMB ELISA Kit

Mouse tissue polypeptide aigen (TPA) ELISA Kit 小鼠組織多肽抗原(TPA)檢測(cè)試劑盒

RatCalretinin,CRELISAKit 大鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFVIIIAg(MouseFactorVIII-relatedAigen)ELISAKit小鼠第八因子相關(guān)抗原

細(xì)胞抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Ratmonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP-1/MCAFELISAKit大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

MET重組食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha 0.5mgIKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha) KB抑制蛋白α抗原

WFDC2重組人 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 Protein

COL4A3BP Protein Human 重組人 COL4A3BP 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

SPN Protein Mouse 重組小鼠 SPN / CD43 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha 0.5mgIKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha) KB抑制蛋白α抗原

COL4A3BP Protein Human 重組人 COL4A3BP 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

MET重組食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

SPN Protein Mouse 重組小鼠 SPN / CD43 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

WFDC2重組人 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 Protein

小鼠神經(jīng)降壓肽()檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Human membrane attack complex (MAC) ELISA Kit 人膜攻擊復(fù)合物(MAC)檢測(cè)試劑盒

HumanHighdensitylipoproteincholesterol,HDL-CELISAKit 人高密度脂蛋白(HDL-C)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

GoatGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRP檢測(cè)試劑盒山羊生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母堿性焦0酸酶(AlkalinePyrophosphatase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MousecoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit小鼠Ⅹ(FⅩ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔胰腺上皮細(xì)胞小鼠前列腺素E2   英文名稱：   prostaglandin E2   規(guī)格：      英文縮寫：   PGE2

小鼠分泌型0脂酶A2   英文名稱：   secretary phospholipase A2   規(guī)格：      英文縮寫：   sPLA2

小鼠多效生長(zhǎng)因子   英文名稱：   Pleioophin   規(guī)格：      英文縮寫：   PTN

小鼠抑癌基因P53蛋白   英文名稱：   aioncogene p53 protein   規(guī)格：      英文縮寫：   P53

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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