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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人胰腺星狀細(xì)胞

英文名稱：Human Pancreatic Stellate Cells

組織來(lái)源：胰腺組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

人胰腺星狀分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、等。胰液通過(guò)胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖；γ細(xì)胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星狀細(xì)胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴，并表達(dá)Desmin蛋白，活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-SMA）。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種，并分別具有特異的標(biāo)志物。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的脂滴可以被油紅O染成紅色，陽(yáng)性表達(dá)Desmin。激活狀態(tài)PSC陽(yáng)性表達(dá)alpha-SMA。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d，胞漿中仍可見(jiàn)明顯的脂滴，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin，48h后Desmin基本不再表達(dá)。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開(kāi)始表達(dá)alpha-SMA，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)和傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA，而不再表達(dá)Desmin，說(shuō)明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動(dòng)了激活過(guò)程，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活，傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時(shí)，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化，促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胰腺星狀采用膠原酶制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胰腺星狀經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔p53(p53)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔(ADR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)試劑盒 96T/48T

Rat advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)試劑盒

HumahromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 人血栓素B2(TXB2)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCollagenaseTypeII試劑盒人膠原酶II(CollagenaseII)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織ABL1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISAKitGFc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CLEC6A重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 Protein

CD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原 0.5mgCD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原)

CCDC134重組人 CCDC134 蛋白 Protein

HNMT Protein Human 重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CD14 Protein Rat 重組大鼠 CD14 蛋白

CD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原 0.5mgCD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原)

HNMT Protein Human 重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CLEC6A重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 Protein

CD14 Protein Rat 重組大鼠 CD14 蛋白

CCDC134重組人 CCDC134 蛋白 Protein

人胰腺星狀細(xì)胞大鼠輕肽鐵蛋白(FTL)試劑盒 ，英文名： FTL ELISA Kit

Mouse angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 小鼠血管生成素1(ANG-1)試劑盒

Ratprostatespecificaigen,PSAELISAKit 大鼠前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGSH-Pxkit(human)人過(guò)氧化物酶試劑盒

細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白3(SI3)活性比色法定量試劑盒20次

Ratypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit大鼠原激活肽(TAP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用