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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。

產品名稱：人外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)

英文名稱：Human Peripheral Blood Maturation Dendritic Cells

組織來源：外周血

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

人外周血DC分離自外周血，由外周血單核細胞誘導而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內細胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強的遷移能力，伴隨有部分未誘導成的單核細胞，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經TNFα、LPS等誘導而成，多數呈懸浮生長， 細胞呈圓形，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志，主要通過形態(tài)學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答，處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產生免疫應答，不能激活T細胞的信號，可導致T細胞無能，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低，一般在30%以下。

實驗室分離的人外周血成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的人外周血樹突狀(成熟DC細胞)經CD86免疫熒光鑒定、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定，純度可達80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：半貼壁半懸浮

細胞形態(tài)：圓形，樹突狀

傳代特性：屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人外周血樹突狀(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(或胚胎組織)由于多種細胞結合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

豬透明質酸(HA)ELISA 試劑盒

Human tissue inhibitors of metalloproteinase 2 (TIMP-2) ELISA Kit 人基質金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)檢測試劑盒

GuineaPigSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforANG-R-Tie1ELISAKit大鼠血管生成素受體Tie1

血液超氧化物陰離子化學發(fā)光法定量檢測試劑盒20次

PorcineFollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit豬促卵泡素(FSH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL20RA重組狗 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (Fc 標簽) Protein

MYOZ/MYOZ1(Myozenin 0.5mgMYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse MYOZ抗原

COL2A1重組人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 標簽) Protein

KCNIP3 Protein Human 重組人 CSEN / Calsenilin / KCNIP3 蛋白

MAP2K1 Protein Mouse 重組小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 蛋白

MYOZ/MYOZ1(Myozenin 0.5mgMYOZ/MYOZ1(Myozenin)human、ret、mouse MYOZ抗原

KCNIP3 Protein Human 重組人 CSEN / Calsenilin / KCNIP3 蛋白

IL20RA重組狗 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (Fc 標簽) Protein

MAP2K1 Protein Mouse 重組小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 蛋白

COL2A1重組人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 標簽) Protein

豚鼠γ干擾素(IFN-γ)檢測試劑盒 ，英文名： IFN-γ ELISA Kit

Human mast cell yptase (MCT) ELISA Kit 人肥大細胞類(MCT)檢測試劑盒

rabbitThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 兔子促甲狀腺素(TSH)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta2-GP1AbIgG(HumanBeta2-Glycoprotein1AibodyIgG)ELISAKit人β2糖蛋白1抗體IgG

細菌脂肪酶(LIPASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次

RabbitEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit兔內皮型合成酶(eNOS)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)人原鈣黏素1(PCDH1)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human PCDH1 (Protocadherin 1) ELISA Kit

人原鈣黏素β2(PCDHβ2)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human PCDHβ2 (Protocadherin Beta 2) ELISA Kit

人原纖蛋白1(FBN1)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human FBN1 (Fibrillin 1) ELISA Kit

人原纖蛋白2(FBN2)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human FBN2 (Fibrillin 2) ELISA Kit

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用