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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人氣管成纖維細(xì)胞

英文名稱：Human Tracheal Fibroblast Cells

組織來源：氣管

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

人氣管成纖維分離自氣管組織；氣管(Trachea)，呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體(相當(dāng)胸骨角平面)交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動(dòng)將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的支氣管成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。氣管成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持組織的正常形態(tài)，合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。

實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管成纖維采用膠原酶 - 聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的人氣管成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人氣管成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。

兔骨橋素(OPN)ELISA 試劑盒

Human ypsinogen II (y- II) ELISA Kit 人原Ⅱ(y-Ⅱ)檢測(cè)試劑盒

Humanai-epidemichemorrhagicfevervirusIgGaibody,EHFIgGELISAKit 人抗流行性出血熱病毒抗體IgG(EHF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanglathioneS-ansferases,GSTpi檢測(cè)試劑盒人硫轉(zhuǎn)移酶pi基因(GSTpi)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織單胺氧化酶B型(MAO-B)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

HumanMothersagainstdecapeaplegichomolog7,Smad7ELISAKit人Smad7檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

LAG3重組大鼠 LAG3 / CD223 / Lymphocyte activation gene 3 蛋白 Protein

DAPK1(Death associated protein kinase 1 0.5mgDAPK1(Death associated protein kinase 1) 凋亡相關(guān)蛋白激酶1抗原

STAT1重組人 STAT1 / p91 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

INSR Protein Human 重組人 Insulin Receptor / INSR / CD220 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

BMPR1A Protein Mouse 重組小鼠 ALK-3 / BMPR1A 蛋白

DAPK1(Death associated protein kinase 1 0.5mgDAPK1(Death associated protein kinase 1) 凋亡相關(guān)蛋白激酶1抗原

INSR Protein Human 重組人 Insulin Receptor / INSR / CD220 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

LAG3重組大鼠 LAG3 / CD223 / Lymphocyte activation gene 3 蛋白 Protein

BMPR1A Protein Mouse 重組小鼠 ALK-3 / BMPR1A 蛋白

STAT1重組人 STAT1 / p91 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

豚鼠白介素5(IL-5)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： IL-5 ELISA Kit

Human dynamin 2 (DNM2) ELISA Kit 人發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)檢測(cè)試劑盒

RabbitIerleukin10,IL-10ELISAKit 兔子白介素10(IL-10)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBeta-EP(humanBeta-Endorphin)ELISAKit人β內(nèi)啡肽

細(xì)菌亞鹽還原酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

RabbitGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISAKit兔子生長激素釋放多肽(GHRP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人氣管成纖維細(xì)胞人著絲粒蛋白B檢測(cè)試劑盒   人著絲粒蛋白B試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人著絲粒蛋白B試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人著絲粒蛋白B試劑盒、人著絲粒蛋白B 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人Apelin36檢測(cè)試劑盒   人Apelin 36試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人Apelin 36試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人Apelin 36試劑盒、人Apelin 36 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

雞白介素4檢測(cè)試劑盒   雞白介素4試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   雞白介素4試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：雞白介素4試劑盒、雞白介素4 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠泰澤病原體檢測(cè)試劑盒   小鼠泰澤病原體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠泰澤病原體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠泰澤病原體試劑盒、小鼠泰澤病原體檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用