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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人腸微血管內皮分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產物的吸收都是在小腸內進行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內大的微生態(tài)系統(tǒng)。微血管是極細微的血管，管徑平均為6-9μm，連于動、靜脈之間，互相連接成網狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進行物質交換。其管壁主要由一層內皮細胞構成，在內皮外面有一薄層結締組織。另外還?？梢姷揭环N扁而有突起的細胞貼在微血管的管壁外面，稱為周細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的人腸微血管內皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人腸微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

兔子內皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 試劑盒

People leils binding type AFP / AFP varia 2 (AFP-L2) ELISA kit E 人小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)檢測試劑盒E

Humanpolyimmunoglobulieceptor,poly-IgRELISAKit 人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humandynorphin,Dyn檢測試劑盒人強啡肽(Dyn)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織P38a激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Humanperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

PTPN11重組小鼠 SHP2 / PTPN11 蛋白 Protein

泛素(Ub)重組蛋白 Recombinant Ubiquitin (Ub)

PRKAR1A重組人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 蛋白 Protein

CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標簽)

EFNA5 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白

轉鐵蛋白受體(TFR)天然蛋白 Native Transferrin Receptor (TFR)

CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標簽)

CD6重組小鼠 CD6 / TP120 蛋白 Protein

PRLR Protein Rat 重組大鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白

CCL1重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 Protein

小鼠胃泌酸調節(jié)素(OXM)檢測試劑盒 96T/48T

Human phosphoenolpyruvate carboxykinase (PCK) ELISA Kit 人0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)檢測試劑盒

Humanalkalinephosphatase,ALPELISAKit 人堿性0酸酶(ALP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenIerleukin1,IL-1檢測試劑盒雞白介素1(IL-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞ERK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人腸微血管內皮細胞小鼠纖維連接蛋白   英文名稱：   Fibronectin   規(guī)格：      英文縮寫：   FN

FMS樣酪酸激酶   英文名稱：   Fms-related tyrosine kinase-3   規(guī)格：      英文縮寫：   Flt3

小鼠Flt3配體   英文名稱：   Fms-related tyrosine kinase-3 Ligand   規(guī)格：      英文縮寫：   Flt3 Ligand

小鼠纖維連接蛋白   英文名稱：    fibronecti   規(guī)格：      英文縮寫：   FN