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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

雞卵泡基膜分離自雞卵泡組織；成熟卵泡是卵巢的組織結(jié)構(gòu)成分之一，卵泡腔很大，卵丘很明顯。卵泡內(nèi)膜細(xì)胞緊靠卵泡顆粒層，與顆粒層細(xì)胞之間有一層基膜相隔，內(nèi)膜細(xì)胞呈多邊形，胞質(zhì)清亮，胞核圓形，細(xì)胞間可見(jiàn)許多毛細(xì)血管，外膜細(xì)胞位于外層，多呈梭形，與周?chē)Y(jié)締組織分界不明顯。卵泡（follicle）中卵母細(xì)胞四周有一層菱形或扁平細(xì)胞圍繞，在卵泡開(kāi)始發(fā)育、卵細(xì)胞成長(zhǎng)的同時(shí)，周?chē)牧庑渭?xì)胞變?yōu)榱⒎叫危⒂蓡螌釉錾蓮?fù)層，因其細(xì)胞漿內(nèi)含有顆粒，故稱(chēng)為顆粒細(xì)胞。初級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞為單層；次級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞增至復(fù)層；成熟卵泡的顆粒細(xì)胞展開(kāi)又變?yōu)閱螌印ｎw粒細(xì)胞的胞核大而圓，著色深，細(xì)胞的游離面有許多細(xì)長(zhǎng)突起伸入放射帶的凹陷部。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞卵泡基膜采用先機(jī)械分離后膠原酶反復(fù)消化法、并通過(guò)專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞卵泡基膜經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠載脂蛋白H(APOH)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： APOH ELISA Kit

Mouse lymphocyte factor ELISA Kit 小鼠淋巴細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒

MouseIerleukin5,IL-5ELISAKIT 小鼠白介素-5(IL-5)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhumanfrizzledhomolog8,FZD8ELISAKit人卷曲蛋白8

細(xì)胞/組織白蛋白載玻片制備試劑盒20次

ELISAKitTIMP-2大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2

EPHA3重組小鼠 EphA3 蛋白 (aa 569-984) Protein

甲狀旁腺激素(PTH)重組蛋白 Recombinant Parathyroid Hormone (PTH)

CPLX3重組人 CPLX3 / Complexin 3 蛋白 Protein

EGFL7 Protein Human 重組人 EGFL7 / VE-statin 蛋白

IL1B Protein Canine 重組狗 IL-1 beta / IL1B 蛋白

甲狀旁腺激素(PTH)重組蛋白 Recombinant Parathyroid Hormone (PTH)

EGFL7 Protein Human 重組人 EGFL7 / VE-statin 蛋白

EPHA3重組小鼠 EphA3 蛋白 (aa 569-984) Protein

IL1B Protein Canine 重組狗 IL-1 beta / IL1B 蛋白

CPLX3重組人 CPLX3 / Complexin 3 蛋白 Protein

小鼠膠原酶I(Collagenase I)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cailage glycoprotein 39 (HC gp-39) ELISA Kit 人軟骨糖蛋白39(HC gp-39)檢測(cè)試劑盒

Humankillercelllectin-likereceptor,KLRELISAKit 人殺傷細(xì)胞凝集素樣受體(KLR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-cytomegalovirusIgGaibody,ai-CMVIgG檢測(cè)試劑盒人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgG(ai-CMVIgG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物基因組DNA化試劑盒(低多糖/酚)50次

Humanα1-Aiypsin,α1-ATELISAKit人α1抗(α1-AT)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

雞卵泡基膜細(xì)胞小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠單胺氧化酶A（MAOA）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠大內(nèi)皮素(BigET)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠催乳素(PRL)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。