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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠胃平滑肌分離自胃組織；胃柔軟，活體呈橘紅色。胃空虛時(shí)形成許多皺襞，充盈時(shí)變平坦。胃壁由粘膜、粘膜下膜、肌膜和漿膜四層構(gòu)成。粘膜上皮為柱狀上皮。上皮向粘膜深部下陷構(gòu)成大量腺體（胃底腺、賁門腺、幽門腺），它們的分泌物混合形成胃液，對(duì)食物進(jìn)行化學(xué)性消化。粘膜在幽門處由于覆蓋幽門括約肌的表面而形成環(huán)狀的皺襞叫幽門瓣。胃肌膜由三層平滑肌構(gòu)成，外層縱形，中層環(huán)形，內(nèi)層斜行，其中環(huán)形肌發(fā)達(dá)，在幽門處特別增厚形成幽門括約肌。胃平滑肌細(xì)胞源自胃的平滑肌層，細(xì)胞通過(guò)緊密連接，進(jìn)行同步性運(yùn)動(dòng)，完成肌肉的舒縮活動(dòng)，以推動(dòng)食物前進(jìn)，完成對(duì)食物的機(jī)械性消化，并促進(jìn)化學(xué)性消化和吸收。胃平滑肌具有肌組織的共同特性，如興奮、自律性、傳導(dǎo)性和收縮性，在離體后，置于適宜的環(huán)境內(nèi)，仍能進(jìn)行良好的節(jié)律性運(yùn)動(dòng)，但其收縮很緩慢，節(jié)律性遠(yuǎn)不如心肌規(guī)則。胃平滑肌對(duì)電刺激較不敏感，但對(duì)于牽張、溫度和化學(xué)刺激則特別敏感，輕微的刺激常可引起強(qiáng)烈的收縮。胃平滑肌的這一特性是與它所處的生理環(huán)境分不開(kāi)的，胃內(nèi)容物對(duì)平滑肌的牽張、溫度和化學(xué)刺激是引起內(nèi)容物推進(jìn)或排空的自然刺激因素。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胃平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胃平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人孕激素/孕(PROG)試劑盒   96T/48T

人原鈣黏素1(PCDH1)試劑盒   96T/48T

人(Protamine)試劑盒   96T/48T

人誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)試劑盒   96T/48T

豚鼠白介素10(IL-10)試劑盒 ，英文名： IL-10 ELISA Kit

Human non neuronal enolase (NNE) ELISA Kit 人非神經(jīng)元性烯醇化酶(NNE)試劑盒

rabbitiestinalfattyacidbindingprotein,iFABPELISAKit 兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/MELISAKit大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M

細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板50個(gè)

RabbitEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit兔子表皮生長(zhǎng)因子(EGF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His 標(biāo)簽) Protein

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)重組蛋白 Recombinant Glucose Transporter 1 (GLUT1)

CGB5重組人 CGB5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

JAG1 Protein Human 重組人 JAG1 / Jagged 1 / CD339 蛋白

HA Protein H12N1 重組甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)重組蛋白 Recombinant Glucose Transporter 1 (GLUT1)

JAG1 Protein Human 重組人 JAG1 / Jagged 1 / CD339 蛋白

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H12N1 重組甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CGB5重組人 CGB5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

大鼠胃平滑肌細(xì)胞人乙型肝病毒X抗原(HBxAg)ELISA 試劑盒

Human tissue polypeptide specific aigen (TPS) ELISA Kit 人組織多肽特異性抗原(TPS)試劑盒

HumanangiotensionⅡreceptor1Aibody,ATⅡR1AbELISAKit 人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanIerleukin4,IL-4試劑盒人白介素4(IL-4)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織亮(leucine)含量比色法定量試劑盒20次

HumanIerleukin23，IL-23ELISAKit人白介素23(IL-23)試劑盒規(guī)格：96T/48T