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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠胎盤間充質(zhì)干分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當?shù)莫毩⑿?。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。胎盤間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cell，MSC）是一種多能干細胞，是具有自我復(fù)制能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞像APSC多能細胞。在胚胎發(fā)育中來源于中胚層。在機體正常的組織損傷修復(fù)過程中，MSC是一種重要的參與組織再生的細胞庫。在組織損傷引起的特殊信號作用下，MSC遷移到受損部位，在局部聚集增殖，依據(jù)不同的損傷信號沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴增，體外倍增能力旺盛，能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實用的組織修復(fù)種子細胞。相較于其他干細胞，胎盤間充質(zhì)干細胞具有來源方便，細胞數(shù)量充足，易于分離、培養(yǎng)、擴增和純化，傳代擴增多代后仍具有干細胞特性。胎盤是干細胞的佳來源。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠胎盤間充質(zhì)干采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠胎盤間充質(zhì)干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

山羊促生長激素釋放激素試劑盒   山羊促生長激素釋放激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   山羊促生長激素釋放激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：山羊促生長激素釋放激素試劑盒、山羊促生長激素釋放激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

雙花扁豆凝集素試劑盒   雙花扁豆凝集素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   雙花扁豆凝集素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：雙花扁豆凝集素試劑盒、雙花扁豆凝集素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

兔子生長激素釋放多肽試劑盒   兔子生長激素釋放多肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子生長激素釋放多肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子生長激素釋放多肽試劑盒、兔子生長激素釋放多肽eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豚鼠白三烯D4試劑盒   豚鼠白三烯D4試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豚鼠白三烯D4試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠白三烯D4試劑盒、豚鼠白三烯D4eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豚鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human inhibitor of apoptosis (IAP) ELISA Kit 人細胞凋亡抑制因子(IAP)試劑盒

Humanai-golgiapparatusaibody,AGAAELISAKit 人抗高爾基體抗體(AGAA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanC-telopeptideoftypeⅠcollagen,CTX-Ⅰ試劑盒人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織EPHA1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanpro-opiomelanocoin,POMCELISAKit人阿黑皮素原(POMC)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New Caledonia/20/1999) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

Shiga-like toxin IIe variant subunit A[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素菌體蛋白(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素菌體蛋白(O139菌型)

REG1A重組人 REG1A / PSPS 蛋白 Protein

IL17F Protein Human 重組人 IL-17F / IL17F 蛋白

F11R Protein Human 重組人 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標簽)

Shiga-like toxin IIe variant subunit A[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素菌體蛋白(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素菌體蛋白(O139菌型)

IL17F Protein Human 重組人 IL-17F / IL17F 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New Caledonia/20/1999) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

F11R Protein Human 重組人 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標簽)

REG1A重組人 REG1A / PSPS 蛋白 Protein

大鼠胎盤間充質(zhì)干細胞人幽門螺旋桿菌熱休克蛋白60(HP-HSP60)試劑盒

Major histocompatibility complex class III (MHC III /HLA- III) ELISA Kit 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)試劑盒

Humanmelanocytestimulatinghormone,MSHELISAKit 人黑色素細胞刺激素(MSH)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanierferon-inducibleprotein10,IP-10試劑盒人干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織精(arginine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

HumanJo-1Aibody,Jo1/HRSELISAKit人Jo1抗體/抗組氨酰NA合成酶抗體(Jo1/HRS)試劑盒規(guī)格：96T/48T