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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠口腔粘膜成纖維分離自口腔粘膜組織；口腔（oral cavity）是消化道的起始部分。前借口裂與外界相通，后經(jīng)咽峽與咽相續(xù)。口腔內(nèi)有牙、舌等器官。口腔的前壁為唇、側(cè)壁為頰、頂為腭、口腔底為黏膜和肌等結(jié)構(gòu)。口腔借上、下牙弓分為前外側(cè)部的口腔前庭（oral vestibule）和后內(nèi)側(cè)部的固有口腔（oral cavity proper）；當(dāng)上、下頜牙咬合時(shí)，口腔前庭與固有口腔之間可借第三磨牙后方的間隙相通。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠口腔粘膜成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠口腔粘膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： sIgA ELISA Kit

Porcine melanoma metastasis surface adhesion molecule (MMSAM) ELISA Kit 豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)檢測(cè)試劑盒

轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforMBPELISAKit大鼠主要堿性蛋白

體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)20次

ELISAKitCC16裸鼠克拉拉細(xì)胞蛋白

IL12A & IL12B重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

IgG-Fc片段低親和力受體Ⅲb(FcγR3B)重組蛋白 Recombinant Fc Fragment Of IgG Low Affinity IIIb Receptor (FcgR3B)

PDIA4重組人 ERP72 / PDIA4 蛋白 Protein

CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白

HAVCR1 Protein Rat 重組大鼠 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白

β-血小板球蛋白(βTG)重組蛋白 Recombinant Beta-Thromboglobulin (bTG)

CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白

CPM重組小鼠 Carboxypeptidase M / CPM 蛋白 Protein

CD63 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

PRTFDC1重組人 PRTFDC1 蛋白 Protein

小鼠抑瘤素M(OSM)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble E selectin (sE-selectin) ELISA Kit 人可溶性E選擇素(sE-selectin)檢測(cè)試劑盒

Humancytokeratin18,CK-18ELISAKit 人細(xì)胞角蛋白18(CK-18)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor6-keto-PGF1a(Mouse6-keto-prostaglandinF1a)ELISAKit小鼠6同前列腺素F1a

飲料D-葡萄糖酸內(nèi)脂比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Mousemalondialchehyche,MDAELISAKit小鼠二(MDA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠口腔粘膜成纖維細(xì)胞血管緊張素I(素、AngI)   96T/48T

固（ALD）   96T/48T

基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）   96T/48T

基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）   96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。