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細胞簡介：

大鼠精原干分離自睪丸組織；精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內(nèi)的一群生精干細胞，是成體內(nèi)的定向干細胞。精原干細胞的一些優(yōu)勢使其成為動物轉(zhuǎn)基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調(diào)節(jié)機制的深入研究，精子發(fā)生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉(zhuǎn)染，異體、異種移植技術的實際應用，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產(chǎn)量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養(yǎng)。在哺乳動睪丸內(nèi)，精子發(fā)生時一個受高度調(diào)控和持續(xù)的過程，精原干細胞（SSCs）一方面進行自我更新維持干細胞數(shù)量，另一方面又不斷執(zhí)行分化成各級生精細胞直至最后生成精子。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物精子發(fā)生的最原始細胞，也是動物體內(nèi)一起能將遺傳信息傳遞的干細胞。精原干細胞體外培養(yǎng)體系的建立，在生物學、醫(yī)學、畜牧業(yè)生產(chǎn)及制備轉(zhuǎn)基因動物等領域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內(nèi)能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠精原干采用先機械吹打、后消化，結(jié)合Percoll密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠精原干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 球形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)檢測試劑盒 ，英文名： ITG β2/CD11+CD18 ELISA Kit

Mouse growth hormone releasing hormone (GHRH) ELISA Kit 小鼠促生長激素釋放激素(GHRH)檢測試劑盒

ELISA 小鼠血小板活化因子(mouse PAF)  進口分裝

CLIAKitforIL-1BetaELISAKit魚類白介素1β

通用型牛病毒性腹瀉病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定量PCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitVIP大鼠血管活性腸肽

SERPINB3C重組小鼠 Serpinb3c 蛋白 Protein

Bcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse 0.5mgBcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse) Bcl-xL蛋白抗原

CXCL12重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a, His 標簽) Protein

FCGR1 Protein Human 重組人 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated

ACVR1B Protein Rat 重組大鼠 ACVR1B / ALK-4 蛋白 (Fc 標簽)

Bcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse 0.5mgBcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse) Bcl-xL蛋白抗原

FCGR1 Protein Human 重組人 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated

SERPINB3C重組小鼠 Serpinb3c 蛋白 Protein

ACVR1B Protein Rat 重組大鼠 ACVR1B / ALK-4 蛋白 (Fc 標簽)

CXCL12重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a, His 標簽) Protein

小鼠(GSH)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human retinoic acid inducible gene /RIG-1 like receptor (RLR) ELISA Kit 人酸誘導基因/RIG-1樣受體(RLR)檢測試劑盒

HumanomeinELISAKit 人網(wǎng)膜素(omein)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-spermaibody,AsAb檢測試劑盒人抗抗體(AsAb)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物纖維二糖酶(cellobiase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Humanoponi，Tn-TELISAKit人肌鈣蛋白T(Tn-T)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠精原干細胞小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠特異生長因子/相關因子(TSGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠羥脯酸(Hyp)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。