- 如何正確使用庚肝抗體IgM檢測試劑盒？
- 618科研采購黃金季——直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞優(yōu)惠
- 提升通用PCR試劑盒靈敏度的5種實(shí)用方法
- 小鼠胎盤泌乳素elisa試劑盒夏季優(yōu)惠活動
- HIC細(xì)胞，人小腸癌細(xì)胞系五一優(yōu)惠活動
- 探針法熒光定量PCR試劑盒在環(huán)境監(jiān)測中的應(yīng)用
- 心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞四月優(yōu)惠活動
- 如何選擇適合的實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒？
- 重組人激活素B，His標(biāo)簽無動物源Activin B新品優(yōu)惠
- 如何正確使用GSH酶聯(lián)免疫分析試劑盒？
純綠青霉PCR檢測試劑盒反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
上一篇 小鼠碳酸酐酶1（CA-1）ELISA試劑盒反應(yīng)步驟 下一篇 防已染料法PCR鑒定試劑盒流程