ELISA試劑盒定量方法的類型和構(gòu)架
采用ELISA技術(shù)進行定量的平臺化方法——一般來說可以分為兩類，即間接法和直接法。
間接法也稱為競爭法，直接法也稱雙抗夾心法。
今天，我們重點為大家介紹直接法。
直接法以定量抗原為例：
首先，以與抗原有強親和力的抗體包被固定在酶標(biāo)板材上，加入抗原標(biāo)準品/樣品反應(yīng)，再加入與抗原有強親和力的抗體并且偶聯(lián)了辣根過氧化氫酶HRP/堿性磷酸酶AP的酶聯(lián)抗體反應(yīng)，后加入酶對應(yīng)的底物顯色，中間通過洗滌去除反應(yīng)體系中未結(jié)上的試劑成分。
這樣信號大小和抗原的濃度成正相關(guān)，隨著反應(yīng)的進行酶標(biāo)板材上固定的成分由抗體，轉(zhuǎn)變?yōu)榭贵w-抗原，后變?yōu)榭贵w-抗原-酶聯(lián)抗體，待測的抗原處于兩個抗體之間，所以也稱為雙抗夾心法。
雙抗夾心法有一個關(guān)鍵點：待檢測的物質(zhì)（如抗原）必須給包被抗體和酶聯(lián)抗體提供兩個結(jié)合位點，這兩個位點可以是抗原上兩個以上相同的結(jié)構(gòu)位點，也可以是不同的結(jié)構(gòu)位點。
一般來說，Elisa的構(gòu)架由標(biāo)準品，內(nèi)控品，空白對照，基質(zhì)對照和待測樣品組成。
標(biāo)準品
根據(jù)實驗的具體應(yīng)用方向來源，標(biāo)準品可以是已知濃度的/國家標(biāo)準品或者商業(yè)化的已知濃度的蛋白分子，也可以是自制的以其他方式定量（如紫外吸收定量）的純度較高的蛋白分子。標(biāo)準品一般為7-8個濃度點，擬合成合適的濃度-信號劑量曲線作為標(biāo)準曲線進行內(nèi)控品和樣品的定量。
內(nèi)控品
其中，內(nèi)控品是能夠使用的、獨立分裝的、特定濃度（高中低）的標(biāo)準品，是監(jiān)控ELISA實驗在單次實驗中的質(zhì)量和的應(yīng)用過程中不同批次標(biāo)準品的過渡橋接。
空白對照
空白對照為不含標(biāo)準品的標(biāo)準品溶液，基質(zhì)對照則為不含樣品的樣品溶液——兩者可能是一樣的成分，也可能是不同的成分，需要根據(jù)實驗的具體情況進行區(qū)分，目的是確認ELISA體系中是否有非特異的交叉反應(yīng)。
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